动物实验的设计和实施

范文1:动物实验的设计和实施

动物实验的设计和实施

一般来说,动物实验的研究工作应该明确描述::研究的目的和/或者需要验证的假说。选择特定动物模型的原因。动物种、品系、来源和类型。

每个独立实验步骤的详细描述,包括研究设计和使用动物数量。数据分析所用的统计学方法。

动物实验设计的意义

一、正确的动物实验设计对提高科学研究质量、发表高水平的学术论文非常重要二、目前许多动物实验质量不高

1、动物质量不高,低级别动物给实验结果的科学性带来影响。

2、实验设计和统计学分析能力有限

三、一个好的实验设计,对统计学分析来说帮助很大,可以使问题变得更加容易解决四、一个不正确的实验设计,导致结果信息无用。

动物实验的分类

1、确证性的实验:用一种最大可能,正确解答问题的系统方法,收集有关处理实施后动物反应的科学数据。

2、探索性的实验:为产生新的假说提供素材。这两类实验都涉及在实验人员的控制下,对动物施加一定的处理或操作,来发现是否处理在实验对象上引起一定的反应,或者对这种反应进行定量。

3、检验性实验:是观察性的实验,用于发现科研人员不能控制的变量之间的联系。这种联系可能是暂时的也可能是长期的。

实验设计的主要目的一是保证所测变量的任何差异是由处理造成的,而不是其他非对照变量引起;另一个目的是通过控制确定的变量在尽可能小的范围内,减少所测反应的变异性,这样对处理效应的评介更准确。

动物模型应用的重要步骤

一、动物实验通常是研究某种类、品系或性别动物的生物学特性,并间接推断人或其他研究对象的相关方面。

二、3个重要方面

1、基于对研究对象和模型(候选)动物中疾病发展方面掌握的已有知识2、进行一个或多个实验,观察模型对所实施的处理如何反应3、考察模型实验的结果与研究对象物种的相关性

3R原则

一、减少 NO.1 Reduction 二、替代 NO.2 Replacement 三、优化 NO.3 Refinement

差异的控制

进行动物试验设计时,需要考虑的一个重要控制因素就是实验中的非研究目的差异。

1、遗传引起表型差异(遗传学质量控制)

2、其他原因,例如:分组因素、饲养条件微小变化3、在实验中引入了太多的背景噪音

一、概述

有机体的形态行为特征要适应环境,正是这种适应的不同导致有机体产生个体之间的差异,因而,动物的适应性的倾向对一个精确的实验设计来说是不可回避的挑战。生物学的观察是在一个可变背景上进行的

1、生命形成的化学过程复杂

2、生命适应环境不停的变化,稳定性差(差异大,所用数量多)差异的来源1、实验者2、动物固有

3、动物所处环境相互作用产生的差异

二、实验者带来的差异1、实验过程的实施

实验操作的一致性、准确性、完整性: A:每只动物更换注射器 B:注射器容量,精确

C:根据称重给药(吸入药品后注射器重量-空注射器重量=剂量) D:良好的操作技术(避免给药时,药物溢漏)实验操作的小心,减少动物紧张情绪: A:代谢

B:血流(影响血流速度,从而影响药物的吸收率)

2、不准确的测量

A:尽管现在的测量手段越来越先进,但是有些方法本身就存在缺陷。

例如:凝胶电泳(点和带的迁移率、密度、大小受很多微妙因素影响);光密度扫描(色彩的饱和度可以使结果呈现非线性)

B:观察动物自然行为的测量,控制更困难。

例如:采用多个不同观察人员,数据交换分析数据。

一个连续的时间点,重复观测。

C:动机状态观察

专业观察人员,采用同一标准。行为类型被分解成更加数量化的组分。动物不同行为分解为元素,采用同一打分系统。

D:整体动物进行实验时,行为学和生态学观测的差异是可以控制的

GLP( good laboratory practice),最根本的基础是实验中得到的数据和信息的可信性是通过人员的工作质量来保证和实现的。实验观察的每一个步骤,必须按照SOP(standard operating procedure)的文本执行。

三、固有动物之间的差异

动物之间除了遗传组成的差异外,许多其他方面的影响也能增加动物间的差异,是我们进行试验设计时需要加以重视和考虑的差异来源。

1、动物来源不同2、动物饲养管理的差别

3、动物生活环境的不同:4、动物健康状况

温度:排气口的温度高3~4度湿度:排气口湿度高5%~10%光线:不同层面,感受光线不同声音:20~40HZ,交配推迟,产仔低

垫料:松木和桉木可以引起大动物肝脏酶活性和细胞毒效应的物质。

四、动物与环境之间相互作用引起的差异

1、动物对环境应激或应激的生理反应、行为反应和生化反应使用环境丰富物,增加生存环境的复杂性,减少应激。2、群居

群居体重差异小,等级明显,丰富物(改善还是恶化)

3、动物与实验操作过程之间相互作用诱发产生的差异是存在的

动物对不同饲养者表现不同,人员保持一致

实验时间和饲养程序的之间的关系:更换笼盒前后给药不同效果,给药顺序不同,同样引起差异

动物发出信号

控制这类差异最有效的方法: A:确保操作人员的熟练程度 B:开始实验前动物适应过程 C:给动物奖励

一、实验设计的最初步骤1、查阅文献

A:明确研究焦点 B:明确方法 C:明确模型 D:评估实验

2、科研方法

A:观察和描述科研中的现象 B:系统的陈述问题和解释问题的假说 C:利用假说预测新的观察结果 D:验证假说

3、问题的陈述、研究的目标和提出假说问题提出:实验将说明的问题是什么意义研究目标:总目标,特殊问题

假说:对每一个至少给出两个预计结果

4、动物模型的确定

使用系统发育水平最低的动物,符合3R原则

使用的动物具有研究要求种属或品系专一特点,特定研究目的必须特点实验期间动物模型维持条件

动物模型来源渠道

最终确定动物模型前征询实验动物兽医意见

5、实验合作者的确定

在研究的过程中,明确应用的试验技术操作,并确认具有相应操作专长的人员来完成。让合作者了解实验:设计、计算、样品收集....实验动物中心可以提供动物实验有关技术操作培训及昂贵设备服务

二、动物实验设计

1、研究方案

根据问题、目标、假说,提出实验操作安排的计划并文字化考虑的方面:

A:动物模型持续时间

B:模型中预期疾病的进程(决定测定的最适时间点)C:人员参加的时间,实验花费D:给药方法E:风险评估

F:统计学方法选定

2、实验单元

可以是一个动物,也可以是一组动物群体

3、N因子;实验组别的动物只数

将适当数量的动物分配到每一个实验组别

每一个实验组别动物数量是通过预期各组接过差异的可能程度和采用统计学的方法计算出来的

一个标准笼盒能够容纳动物的数量

4、对照

过多的变量(如遗传、环境、感染因子)对动物试验的结果产生影响,因此为消除这些外来变量或可能存在的未知变量的影响而设置对照动物。对照种类:阳性对照阴性对照空白对照媒介物对照比拟物对照

阳性对照:

一般在阳性对照组希望有变化

作用:作为一个标准,测量各实验组间差异的程度。

例如:毒物试验,动物给予毒物作为对照,结果是产生损伤或变化

阴性对照:

期望有正常状态不产生变化

作用:保证未知变量对实验组动物引起相反的效应不存在,即排出假阳性

空白对照

模拟处理组的过程而实际上没有给予动物以受试物或处理。移植或损伤

媒介物对照

在测试化合物溶于一种媒介时,这种媒介需要对照

作用:观察溶剂是否引起反应

比拟物对照

与阳性对照性质一样,使用一个已知的处理来对比待测的处理例如:药物治疗,使用一种已知临床药物,对比实验药物。

5、动物分组的随机化

动物实验时必须把动物随机分配到实验各组,以确保研究的变量在每一组中不会导致偏差数据。

必须在选择的时候选定同源的动物群体,生物学特性一致的动物方法: A:每一只动物一个编号,1第一组,2第二组………暗箱抽取

B:动物多可以利用数字随机或计算机程序随机

三、实验设计的最后考虑

实验设计完成后要进行进一步的确认和审查,并在正式实验前进行小规模的预实验,初步检验设计的合理性,并为进一步的完善提供依据。1、实验步骤地确定

实验开始前必须通过IACUC和实验动物伦理委员会的确认。包括动物饲养管理和使用的具体操作方法。按照相关法律。

提供申请书时,需要相关证明。

实验涉及到危险品,还需要其他委员会的批准。

2、人员

必须有相关培训人员才能承担实验。我国由省级科技主管部门进行培训。

3、小规模的预实验

小规模的预实验是使用少量的动物得到预示性的数据或通过预实将操作和技术固定并完善,以便于进行大规模的正式实验。通过预实验确定实验动物用量。证明实验合理性。

预实验同样需要经过IACUC同意。

4、数据的输入和分析

实验设计时应该规定在数据分析前,制定保证数据质量的措施和程序,确保实验后数据收集或输入发生的错误能被及时辨别出来。5、讨论实验设计完成后广泛征求意见。样本大小的确定

在实验设计中确定样本大小十分重要 A:满足科学研究需求 B:符合实验动物法律法规

C:符合3R原则

由于科研目的的不一样,采用的实验动物种类也不一样,计算实验样本大小的方法也就不一样。

一、小规模预实验原因:实验前缺乏资料信息或实验成功是否能够把握有些实验无法计算样本大小(转基因动物实验)

一般实验,复杂的统计学设计都可以简化成一个重要事件的比较样本量足够大可发现统计学的结果检查所要进行实验的必备条件

二、基于目标成功或失败的实验

由于实验中成功的机会相当不稳定,因此这类实验所用的动物数量很难确定例如:转基因动物 DNA整合率

移植后受精卵的着床率

整合位置和表达效果

假定每个步骤地效率5%根据公式这需要50只动物,如果1%则需要300只动物。

三、验证假说的正式实验

大多数实验属于检验一个假说的正式实验,一般使实验都可以得到一些有用的信息,可以用来计算实验所需要的动物数量。在这类实验中,一般科研人员可以测定三种类型的变量:A:二分变量:表现为是/否的结果百分率,比如死亡率。

B:连续变量:某一物质在体液中浓度或生理功能(如血流速或尿量)C:一个事件的发生时刻:疾病或死亡出现的时间。

1、确定检验的假说

假说可以简单的归结成一个或几个问题,两组或几组数据的比较

组间差异越小或群体变异越大,观察到显著性差异的样本量肯定越大

2、效应大小、标准误差、力度和显著性水平计算样本大小需要3-4个已知因素:A:效应大小:一般为两组之间的差别

B:对连续性变量而言的群体标准误差(SD)C:测定假定效应的期望力度

D:显著水平

为避免偏差假定动物被随机分配到不同的测试组,饲养在相同的环境中,这时实验的力度是指实验效应被测出的概率,一般为0.8或0.9,即科研人员在假定效应存在的情况下,有80%或90%机会发现统计学意义上的结果。

1减去力度(β)得到的是假阳性结果的概率,即不能拒绝否定一个不真实无效假说或不能测得某特定处理效应的概率。

阳性结果的规定概率即显著性水平(α),一般为0.05或0.01。换句话说,科研工作者错误表明差别“差别”的机会不大于5%或1%一旦力度值和显著性水平选定,统计学模型选定,然后根据研究者期望效应和群体SD因子,就可以计算出实验所用样本的大小

范文2:动物实验设计

奥扎格雷注射液治疗急性心肌梗死

课题来源:自选

设计班级:2012级在职研究生

设计人员:郭红前 T2012044

设计日期:2012年10月26日

一、实验设计的目的意义:实验设计的目的意义,国内外研究现状,存在的问题,解决问题的思路。

目的与意义:复制急性心肌梗死动物模型,观察奥扎格雷注射液的疗效,从而探讨奥扎格雷注射液是否对急性心肌梗死有较好的临床效果,为临床上提供抗血小板注射药治疗急性心肌梗死的新思路。

国内外研究现状:急性心肌梗死(AMI)是由冠状动脉供血不足所引起的心肌坏死的临床综合征,AMI发病突然、凶险、病死率高,抢救治疗必须争分夺秒。急性心肌梗死常导致冠心病[1]患者心律失常及心脏骤停,严重可导致患者猝死。患者由于冠状动脉病变,动脉内粥样斑块破裂,使冠状动脉供血不足而导致心肌急性坏死。其治疗原则是尽快抢救恢复心肌的血液[2]灌注和及时、充分开通闭塞的血管,以挽救存活及濒死心肌;防止梗死扩大或缩小心肌缺血范围,限制和缩小梗死面积可以最大限度地减少心脏泵功能衰竭或与其相关的致命性心律失常以及心脏破裂的发生,保护和维持心脏功能;及时处理并发症[3];是急性心肌梗死治疗的重要目标之一。而治疗时如何使急性闭塞的梗死相关血管尽早恢复前向血流,实现早期再灌注(早期血运重建)是达到上述目标的关键。近年来,对AMI的治疗进展较快,而且对改善AMI的预后起到了积极重要的作用,取得了很好的效果,AMI的治疗方法包括溶栓治疗、经皮[4]冠状动脉介入(PCI)、冠状动脉搭桥术(CABG)、心肌干细胞移植等。

奥扎格雷为血栓烷(TX)合酶抑制剂,能阻碍前列腺素H2(PGH2)生成血栓烷A2(TXA2),促使血小板所衍生的PGH2转向内皮细胞。内皮细胞用以合成PGI2,从而改善TXA2与前列腺素PGI2的平衡异常。理论上能抑制血小板的聚集和扩张血管作用。主要用于急性脑梗塞的治疗。冠状动脉粥样斑块的不稳定性决定了不稳定性心绞痛的发生机制,脂质斑块的破裂是由纤维帽变薄和脂质斑块增大,以及炎症的发生,炎性细胞的侵润,血管壁所受的剪切力增大,产生斑块破裂、冠状动脉就可能被纤维蛋白原、血小板聚集物和红细胞集合而堵塞,导致腔内不全性狭窄、阻塞,而形成临床不稳定型心绞痛。由血小板激活释放的TXA2可以诱发冠脉痉挛,加重冠脉狭窄。UAP的血栓大多数是以血小板为主要成分,纤维[5]成分少的“白血栓”或“灰血栓”,因此,抗血小板凝集的治疗意义非常大。目前普遍认为体内血栓调节机制是由前列腺素G2(PGG2)和前列腺素H2(PGH2)在凝血恶烷A2(TXA2)合成酶的作用下形成TXA2,从而促使血小板聚集而形成血栓;另一方面PGG2和PGH2又在前列环素I2合成酶作用下可转化成前列环素I2(PGI2),抑制血栓的形成,促使血栓溶解。奥扎格雷钠为凝血恶烷A2(TXA2)合成酶抑制剂,能选择性抑制TXA2合成酶,同时也能增强PGI2合[6]成酶达到消除血栓。

存在的问题:目前临床上奥扎格雷注射液主要用于治疗急性脑梗塞,蛛网膜下腔出血脑血管痉挛等疾病。但在急性心肌梗死方面治疗应用经验不足。

解决问题的思路:复制急性心肌梗死的动物模型。对急性心肌梗死动物给予奥扎格雷注射药,观察治疗疗效。

参考文献:

[1]项建立.急性心肌梗死的治疗进展[J].医学理论与实践,2009,22(8):9079l1.[2]贾浩.急性心肌梗死不同时期溶栓的疗效观察和分析[J].临床医学,2006,26(10):6667.

[3]叶任高,陆再英.内科学.人民卫生出版社,2006:283-297.[4]中华医学会心血管病学分会.急性心肌梗死诊断和治疗指南.中华心血管病杂志,2001,

29:713-714.

[5]李元玖,李正信,张颖,等.降纤酶抗心绞痛作用与血浆纤维蛋白原及纤溶系统关系的研究[J].临床内科杂志,2004,10:698.[6]吕红星,刘鸿雁,张国莉,等.奥扎格雷钠治疗脑血栓形成[J].中国新药与临床杂志,1999,18(1):57.

二、实验设计方案(实验设计目标,拟解决的主要问题,实验动物设计,实验专业设计,实验统计设计,实验方法设计,可行性分析,预期结果,实验设计工作时间安排)。(一)实验设计目标,拟解决的关键问题

设计目标:研究奥扎格雷注射药能否用于急性心肌梗死,观察其对急性心肌梗死时堵塞血管有无再通作用及侧枝循环建立有无帮助。拟解决的关键问题:sD大鼠经戊巴比妥钠麻醉后,经口人工呼吸,开胸结扎左冠状动脉前降支,制备动物试验性急性心肌梗死模型。对试验性急性心肌梗死模型进行分组与实验结果分析。(二)实验设计1、实验动物设计

实验动物的描述:健康雄性SD大鼠100只,SPF级,4~6周龄,体重17~l8g。实验动物遗传背景:此动物为近交系动物,近交代数为10,品系数为12。

实验动物的微生物背景:要求对毛滴虫,鞭毛虫,金黄色葡萄球菌,肺炎链球菌,乙型溶血性链球菌,绿脓杆菌,小鼠肺炎病毒,小鼠脑脊髓炎病毒,做国家标准性检测。我们选用200250g左右的雄性SD大鼠作为实验动物,有以下几点理由:

(1)、SD大鼠易得到,价格适中且容易饲养,在科研中已被广泛利用。(2)、 SD大鼠的冠状动脉左前支易找到,使得冠状动脉结扎术的难度减小,且术后存活率高身体机能恢复较快。2、实验专业设计

选用雄性SD大鼠作为实验动物,分别给予奥扎格雷注射液观察对实验性急性心肌梗死治疗作用。观察心电图、心肌组织HE染色、梗死面积、梗死区室壁厚度变化、心室肌质量/体重、颈总动脉收缩压(SBP)和舒张压(DBP),向前推送导管至左心室测量左室收缩压(LVSP)、左室舒张末压(LVEDP)、左室内压最大上升和下降速率(±dp/dtmax)等参数。[9]3、实验统计设计

(1)随机:先将试验大鼠称重,然后先按体重每10g为一个重量级,从小到大排列为2个组,随后用龙胆紫和苦味酸将大鼠进行标记,龙胆紫表示个位,苦味酸表示十位,从大鼠的左爪开始标记,记为1,随后依次将左侧腹部,左后爪,右前爪,右侧腹部,右后爪,颈部,背部,尾部记为2,3,4,5,6,7,8,9。随后得到大鼠1至80的编号,再在随机数表中查询数字并分组。

(2)对照:本组实验做了空白对照和实验对照,在前面的专业设计里已经提及。(3)重复:本实验采用的是每实验小组有20只SD大鼠,具有一定的重复性。

(4)统计数据收集:本实验搜集计量资料,初步确定对各组实验数据的比较分为实验值和基础值比较。

(5)统计数据分析

本实验采用计量资料来测定各种指标的数值,除了心电图外所有数据均采用平均数±标准差(±s)表示,两组间实验数据比较行完全随机单因素方差分析,奥扎格雷注射液组,造模组间行两样本比较t检验,均以0.05作为显著性检验水准。4、实验方法设计实验技术路线

SD大鼠模型组治疗组不做任何治疗奥扎格雷治疗心电图HE染色试验、梗死面积大小、梗死区室壁厚度变化、心室肌质量/体重、SBP、DBP、LVSP、LVEDP、左室内压最大上升和下降速率心电图HE染色试验、梗死面积大小、梗死区室壁厚度变化、心室肌质量/体重、SBP、DBP、LVSP、LVEDP、左室内压最大上升和下降速率

实验技术方法

(1)随机抽样:选正常成年健康重量相近的SD大鼠100只,从造模成功的大鼠中选出80只大鼠按体重由小变大编号后,从随机数字表中查取随机数字,依次抄录于SD大鼠编号。

(2)实验编号与分组:先将试验大鼠称重,然后先按体重每10g为一个重量级,

从小到大排列为若干个组,随后用龙胆紫和苦味酸将大鼠进行标记,龙胆紫表示个位,苦味酸表示十位,从大鼠的左爪开始标记,记为1,随后依次将左侧腹部,左后爪,右前爪,右侧腹部,右后爪,颈部,背部,尾部记为2,3,4,5,6,7,8,9。随后得到大鼠1至80的编号,再在随机数表中查询数字并分组。

(3)实验手术:抓取手术大鼠,观察其是否健康,如果老鼠身体状况有异,应要更换老鼠。然后在电子称上称其重量,并做好记录,根据体重严格计算麻醉剂量,采用胸部注射麻药。大约三分钟左右,大鼠出现站立不稳,醉酒样步态。四肢固定与手术台上,松紧适中,手术过程中注意观察四肢是否出现瘀血,注意按摩。此时,可用大头针刺激大鼠尾巴,如果大鼠的反应不强烈,预示着可以开始手术。首先剪除大鼠前胸区域毛,而后均匀喷洒碘伏溶液于备皮区域。开通人工呼吸,BL一410生物机能实验系统行心电监测,从左胸纵切口分层开胸。

(4)模型复制:于胸骨左缘第4肋间用血管弯钳稍用力穿透肋间肌进入胸腔,并迅速沿肋间隙方向撑开血管钳而钝性分离肋间肌;术者用另一血管弯钳垂直肋间隙撑开肋骨,暴露心脏。在肺动脉圆锥和左心耳之间,距左冠状动脉起始2mm处穿50号无创伤丝线,结扎该段冠状动脉。结扎后可见左室前壁失去原有光泽,变苍白,并出现搏动减弱,心电监测可见肢体导联R波振幅明显升高,随后出现I、aVL导联ST段明显抬高,证实制作AMI模型成功。术后注射青霉素预防感染。

(5)处理措施:

1.奥扎格雷注射液:建模成功后即刻注射奥扎格雷注射液0.2mg/100g,以后每隔24h按[10]上述剂量注射一次。2.损伤组:建模成功后不给予任何治疗措施。

(6)取材:将压力传感器与BL-410生物信号采集系统连接,测量并记录所需要的各项指标。经股静脉注入10%KCl 2 ml,使心脏停搏于舒张期,迅速取出心脏,用PBS液洗去血液,滤纸吸净水分后用电子天平(精确到0.1 mg)分别称取左、右心室实际重量(LVAW、RVAW),计算其与体质量(BW)的比值,得到左、右心室相对重量(LVRW、RVRW)。将心脏从心尖到心底沿长轴横切4等分,用4%多聚甲醛固定24 h后分别石蜡包埋。各取一张5μm的病理切片作HE染色。[11]用HPIAS彩色病理图文分析系统测量每张切片的心内膜缘总长及心梗部位心内膜缘长度,计算梗死面积。

(7)指标检测:

①心电图:于术后0h、24h、1w、2w、3w、4w,分别观察其心电图的变化。

②HE染色切片观察:在24h、1w、2w、3w、4w,时分别从5组中每组随机取出4只大鼠处死,并迅速取出心脏,PBS液洗去血液。用甲4%多聚甲醛固定24 h后分别石蜡包埋。各取一张5μm的病理切片作HE染色并观察。

③血流动力学检查(SBP、DBP、LVSP、LVEDP、左室内压最大上升和下降速率)在24h、1w、2w、3w、4w,时分别从5组中每组随机取出4只大鼠,用3%戊巴比妥钠(45 mg/kg)腹腔注射麻醉,气管切开插管,保持呼吸道通畅。分离右侧颈总动脉,插入2F聚乙烯

导管,0.3%肝素生理盐水抗凝,将压力传感器与BL-410生物信号采集与处理系统连接,测量并记录颈总动脉收缩压(SBP)和舒张压(DBP),向前推送导管至左心室测量左室收缩压(LVSP)、左室舒张末压(LVEDP)、左室内压最大上升和下降速率(±dp/dtmax)等参数。

测定SBP、DBP、LVSP、LVEDP、左室内压最大上升和下降速率的意义:这些指标能直接反应出心脏的恢复情况,从而了解到各种处理措施对大鼠恢复心脏功能的作用。

4梗死面积大小、梗死区室壁厚度变化、心室肌质量/体重指标的测定:在24h、1w、○2w、3w、4w,时分别从2组中每组随机取出4只大鼠,处死大鼠后用滤纸洗净,用电子天平分别称取左、右心室实际重量(LVAW、RVAW),计算其与体质量(BW)的比值,得到左、右心室相对重量(LVRW、RVRW)。将心脏从心尖到心底沿长轴横切4等分,用尺子测量心室的厚度,并用4%多聚甲醛固定24 h后分别石蜡包埋。用HPIAS彩色病理图文分析系统测量每张切片的心内膜缘总长及心梗部位心内膜缘长度,计算梗死面积。[12]从梗死面积的变化情况可以知道该处理措施是否减小了梗死面积,从梗死区室壁的厚度变化我们可以知道各种药物处理是否对心室壁的重构有影响,从心室肌质量/体重可以知道心肌代偿肥大的程度。(三)可行性分析

1、SD大鼠易得到,容易饲养,在科研工作中被广泛利用。2、手术器材、设备、仪器、药品均为实验室常用或易于得到。3、实验药品较便宜,且选用大鼠使实验成本较低。(四)预期效果

1、奥扎格雷注射液治疗急性心肌梗死疗效更明显。

2、为临床上进一步应用奥扎格雷注射液治疗急性心肌梗死提供可靠依据。3、奥扎格雷注射液可以考虑作为临床上治疗急性心肌梗死的一线用药。(五)实验设计工作时间安排

1、共计2d完成分组及编号2、共计7d完成模型复制3、共计35d完成实验

三、完成实验的条件

1、仪器设备情况:本实验采用机能实验室常用手术器械、大鼠板、2F聚乙烯导管、注射器、电子秤、鼠笼、显微镜、高压灭菌锅、尺子、BL-410生物信号采集系统、HPIAS彩色病理图文分析系统等。

2、实验动物情况:健康SD大鼠100只。

3、药品试剂来源:戊巴比妥钠、75%消毒酒精、碘伏、生理盐水、0.3%肝素生理盐水、4%多聚甲醛、青霉素、复方丹参注射液、黄芪注射液、阿托普利、苏木精伊红试剂、龙胆紫、苦味酸等。

范文3:如何设计动物实验

如何设计动物实验

一般来说,动物实验的研究工作应该明确描述,研究的目的和/或者需要验证的假说。1、选择特定动物模型的原因。2、动物种、品系、来源和类型。3、每个独立实验步骤的详细描述,包括研究设计和使用动物数量。4、数据分析所用的统计学方法。动物实验设计有重要的意义的意义1、正确的动物实验设计对提高科学研究质量、发表高水平的学术论文非常重要2、目前许多动物实验质量不高。3、一个好的实验设计,对统计学分析来说帮助很大,可以使问题变得更加容易解决4、一个不正确的实验设计,导致结果信息无用。实验设计的主要目的一是保证所测变量的任何差异是由处理造成的,而不是其他非对照变量引起;另一个目的是通过控制确定的变量在尽可能小的范围内,减少所测反应的变异性,这样对处理效应的评介更准确。我将它分为以下几个步骤一、实验设计的最初步骤1、查阅文献

A:明确研究焦点 B:明确方法 C:明确模型 D:评估实验2、科研方法

A:观察和描述科研中的现象 B:系统的陈述问题和解释问题的假说 C:利用假说预测新的观察结果 D:验证假说3、问题的陈述、研究的目标和提出假说

问题提出:实验将说明的问题是什么,意义研究目标:总目标,特殊问题

假说:对每一个至少给出两个预计结果4、动物模型的确定

使用系统发育水平最低的动物,符合3R原则

使用的动物具有研究要求种属或品系专一特点,特定研究目的必须特点实验期间动物模型维持条件动物模型来源渠道

最终确定动物模型前征询实验动物兽医意见5、实验合作者的确定在研究的过程中,明确应用的试验技术操作,并确认具有相应操作专长的人员来完成。

让合作者了解实验:设计、计算、样品收集....

实验动物中心可以提供动物实验有关技术操作培训及昂贵设备服务二、动物实验设计1、研究方案

根据问题、目标、假说,提出实验操作安排的计划并文字化考虑的方面:

A:动物模型持续时间 B:模型中预期疾病的进程(决定测定的最适时间点)

C:人员参加的时间,实验花费D:给药方法

E:风险评估F:统计学方法选定2、实验单元

可以是一个动物,也可以是一组动物群体

3、N因子;实验组别的动物只数

将适当数量的动物分配到每一个实验组别

每一个实验组别动物数量是通过预期各组接过差异的可能程度和采用统计学的方法计算出来的

一个标准笼盒能够容纳动物的数量4、对照

过多的变量(如遗传、环境、感染因子)对动物试验的结果产生影响,因此为消除这些外来变量或可能存在的未知变量的影响而设置对照动物。对照种类:

阳性对照阴性对照空白对照媒介物对照比拟物对照阳性对照:

一般在阳性对照组希望有变化

作用:作为一个标准,测量各实验组间差异的程度。

例如:毒物试验,动物给予毒物作为对照,结果是产生损伤或变化阴性对照:

期望有正常状态不产生变化作用:保证未知变量对实验组动物引起相反的效应不存在,即排出假阳性空白对照

模拟处理组的过程而实际上没有给予动物以受试物或处理。移植或损伤媒介物对照

在测试化合物溶于一种媒介时,这种媒介需要对照作用:观察溶剂是否引起反应比拟物对照

与阳性对照性质一样,使用一个已知的处理来对比待测的处理例如:药物治疗,使用一种已知临床药物,对比实验药物。5、动物分组的随机化

动物实验时必须把动物随机分配到实验各组,以确保研究的变量在每一组中不会导致偏差数据。

必须在选择的时候选定同源的动物群体,生物学特性一致的动物方法: A:每一只动物一个编号,1第一组,2第二组………暗箱抽取 B:动物多可以利用数字随机或计算机程序随机三、实验设计的最后考虑

实验设计完成后要进行进一步的确认和审查,并在正式实验前进行小规模的预实验,初步检验设计的合理性,并为进一步的完善提供依据。1、实验步骤地确定

实验开始前必须通过IACUC和实验动物伦理委员会的确认。包括动物饲养管理和使用的具体操作方法按照相关法律

提供申请书时,需要相关证明

实验涉及到危险品,还需要其他委员会的批准

2、小规模的预实验

小规模的预实验是使用少量的动物得到预示性的数据或通过预实将操作和技术固定并完善,以便于进行大规模的正式实验通过预实验确定实验动物用量证明实验合理性

预实验同样需要经过IACUC同意3、数据的输入和分析

实验设计时应该规定在数据分析前,制定保证数据质量的措施和程序,确保实验后数据收集或输入发生的错误能被及时辨别出来。4、讨论

实验设计完成后广泛征求意见

在实验设计中确定样本大小十分重要 A:满足科学研究需求 B:符合实验动物法律法规 C:符合3R原则

由于科研目的的不一样,采用的实验动物种类也不一样,计算实验样本大小的方法也就不一样。

学号:2011011050姓名:冯建

年纪:2011级临床3班